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用培养基可能会造成不必要的干扰,有什么缓冲液可以代替或是用生理盐水吗?购买的ATCC标准株一般都是细菌的液体培养物经低温真空冻干,可在培养物中加入几滴该菌的液体培养基,混均后接种到固体平板或液体培养基中.
菌种到底是个什么东西呀?相信大家应该都没有听说过,或许极少数人会知道,那么菌种是如何培养出来的想必大家都不是很清楚,它的培养条件又是怎样的呢?为了帮助大家能更好的了解菌种,下面就为大家讲讲菌种的培养条件.
1.培养条件和菌龄实践证明,采用适培养基和适保藏温度进行保藏,可提高微生物的存活率,延长菌种保藏期.研究表明,处于稳定期的细胞或成熟的孢子对不良环境具有较强的抗性,因而,保藏非芽胞细菌和酵母菌,应采用对数末期或稳定初期的细胞.而保藏芽胞细菌、放线菌和霉菌,要用成熟的孢子.
2.菌种悬液的浓度为了保证菌种保藏期间具有一定的存活细胞,往往将保藏微生物的细胞浓度增大.一般要求细菌细胞和放线菌孢子的浓度?108/ml,酵母菌细胞和霉菌孢子的浓度>107/ml.液氮超低温冷冻、真空干燥和真空冷冻干燥过程中,高浓度细胞可降低每个细胞暴露在介质中的面积,从而增强了抗冷冻和抗干燥的能力,提高了细胞的存活率.
3.保护剂采用液氮超低温冷冻、真空干燥和真空冷冻干燥保藏菌种,保护剂的选择是提高微生物冷冻或干燥存活率,延长菌种保藏期的关键因素.保护剂分为低分子保护剂(低聚糖类、醇类、缓冲盐类、氨基酸和维生素类)和大分子保护剂(蛋白质和多肽类、多糖类).不同微生物菌种所适宜的保护剂不同,必须通过试验筛选而确定.
4.冻结速度在液氮法和冻干法保藏菌种的过程中,冻结速度是影响微生物存活率的重要因素.研究表明,真核微生物菌种适宜慢速冻结,而原核微生物菌种经慢速冻结和快速冻结后,细胞存活率差异不显著.我国菌种保藏一般采用三种方法:斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、冷冻干燥保藏法.对放线菌还另有沙土管保藏法,对丝状真菌另加麸皮保藏法.的美国典型菌种保藏中心(ATCC),采取两种有效的保藏方法,即保藏期一般达5--15年的冷冻干燥保藏法和保藏期一般达20年以上的液氮保藏法,以达到大限度减少传代次数,避免菌种退化.当菌种保藏机构收到合适菌种时,先将原种制成若干液氮保藏管作为保藏菌种,然后再制成一批冷冻干燥管作为分发用.经5年后,若代(原种)的冷冻干燥保藏菌种已分发完毕,就再打开一瓶液氮保藏原种制成一批冷冻干燥管作为分发用.这样,至少在20年内,凡获得该菌种的用户,至少只是原种的第二代,可以保证所保藏的分发菌种的原有性状.
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